Ultralyd Homogenizer

Vanlige spørsmål om ødelagte cellerhttp://www.scientzbio.com/

Hva er betingelsene for sonication av Streptomyces (actinomycetes)?

Analytiske: actinomycetes tilhører (G + C) molar prosentandelen (mol %) av Gram-positive (Eubacteria) forgrening gruppen på stamtre av prokaryote system, som har molekylære og biologiske egenskapene unike for prokaryoter. Men i sine ulike grupper varierer den kjemiske sammensetningen av cellen vegg mye.

I E. coli ultralyd, 400W brukes, og bryte 5s for 5s er effektive, men det brukes på Streptomyces, og det har ingen effekt på grunn av forskjellen i celleveggen komposisjon. Pre spinning behandling av Streptomyces (actinomycetes) er vanligvis konfigurert til en viss konsentrasjon av bakteriell suspensjon. De spesifikke vilkårene for knusing bruker ultralyd celle disruptor er: samle bakterier i 24 h kultur løsningen på 5 000 r / min for 5 min å samle celler. vask med en pH 7.5 Na2HPO-NaH2PO buffer 3 ganger, og deretter cellene var formulert i en 1:3 bakteriell hjuloppheng med bufferen. Plassert i en 40 mL store plast reagensglasset; Plasser store plast reagensglasset i en isbadet og knuse det med en ultralyd celle disrupter (strøm 200W, 1/2" sonde, knuse for 30s, intermitterende 30s); knusing løsning på 12 000 r/min sentrifuge med høy hastighet for 30 min, samle celle rusk og nedbryting. Vask celler kan også vaskes en gang med pre-avkjølt saltvann eller Tris-HCl ved pH 8. I tillegg varierer ultralyd dosen sterkt med utvalg og bakterier. Kraften kan 400-600w, knust av 5s, stoppet for 5s, legges isbadet og endelige konsentrasjonen av 1 mM PMSF. For å fastslå riktig ultralyd intensiteten og frekvens, er det nødvendig å kontrollere om bakterier er fullstendig ødelagt når som helst.