Vanlige problemer når ultralyd homogenisator bryter Escherichia coli

E. coli uttrykker fremmed protein. Når sonikert, suspenderes det i PBS som inneholder 1% triton-X-100. Ultralydseffekten er bedre. Effekten av 1% triton-X-100 er fremdeles åpenbar. Fungerer som Streptomyces.

Bakteriell nedbør legger direkte til prøve 1 buffer, tilsetter 5 ml merkaptoetanol, blandes, sentrifugeres, kokes i 10 minutter, direkte belastning, farging og dekoleringstrinn er som følger: Legg limet i riktig mengde fargestoff i mikrobølgeovnen i 1 min, farging løsningen erstattes med en stor mengde Vannet kan kokes i mikrobølgeovnen i 10 minutter.

Etter å ha uttrykt det rekombinante protein ble cellene forstyrret ved ultralydbølge ved bruk av et isbad, 400W og 2S stoppet for 1S, men en stor mengde skum ble generert på kort tid, hvilket påvirket knusningseffektiviteten. Både pbs og tris buffere var de samme, og til slutt var knusingen ufullstendig. Men mitt målprotein er i disse ubrukte cellene, noe som gjør at jeg ikke klarer å få eksperimentelle resultater.

La meg gi deg en analyse av hvorfor denne situasjonen og løsningen.

1. Bobler vil bli generert fordi sondeposisjonen ikke er plassert godt, sonden må være nær bunnen, ca 1 cm (jeg er vanligvis 0,5 cm fra bunnen), instrumentet vil ha forskjellige effektnivåer, men du kan observere side, det er svingninger, men ikke vær for aggressiv.

2. Super 3S stopper 10S, ultralyd ca 20 ganger for å se effekten

3. Vær oppmerksom på hornets posisjon. Hvis du ikke er riktig, bør du justere den i tide. I tillegg, fra perspektivet av konsentrasjonen av bakterier, prøv å øke volumet når det knuses, bør styrken ikke overstige 60%.

4. Prøv 8S for Super 8S. For noen bakterielle proteiner er metoden vanskelig å spre varme, noe som resulterer i protein denaturering og boblgenerering. Det er best å pause litt lenger. Dette er mer vanlig i form av inkluderingsorganer.